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1、多项选择题 酶在储存过程中迅速失活,可能原因是()
A.储存温度不合适
B.稀释后储存
C.储存缓冲液不合适
D.分装后储存
E.储存缓冲液中蛋白浓度低
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本题答案:A, B, C, E
本题解析:暂无解析
2、单项选择题 cDNA第一链合成所需的引物是()
A、PolyA
B、PolyC
C、PolyG
D、PolyT
E、发夹结构
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本题答案:D
本题解析:暂无解析
3、问答题 用酚抽提蛋白质时,离心后,为什么蛋白质总是会停留在水相和酚相之间?
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本题答案:酚使蛋白分子间脱水而变性,变性蛋白的密度比水大,但比酚
本题解析:试题答案酚使蛋白分子间脱水而变性,变性蛋白的密度比水大,但比酚小,因此停在中间。
4、单项选择题 大肠杆菌出现感受态的生理期是()
A.潜伏期
B.对数期
C.对数后期
D.平衡期
E.衰亡期
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本题答案:B
本题解析:暂无解析
5、单项选择题 BamHI、XbaI、BglII的识别位点分别是:G↓GATCC、T↓CTAGA、A↓GATCT,哪些酶切结果可产生互补的末端?()
A.以上几种酶切结果产生的末端都可互补
B.产生的末端都不能互补
C.仅BamHI与BglII的酶切末端互补
D.仅BamHI与XbaI的酶切末端互补
E.仅XbaI与BglII的酶切末端互补
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本题答案:C
本题解析:暂无解析
6、单项选择题 用下列方法进行重组体的筛选,只有()说明外源基因进行了表达。
A.Southem印迹杂交
B.Northem印迹杂交
C.Western印迹
D.原位菌落杂交
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本题答案:C
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7、问答题 原核生物和真核生物的基因表达调控有何差别?
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本题答案:1)原核基因表达调控的三个水平:转录水平调控、翻译水平
本题解析:试题答案1)原核基因表达调控的三个水平:转录水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控
原核基因表达调控主要是在转录水平上的调控。
2)真核生物基因表达的特点:
1.基因组DNA存在的形式与原核生物不同;
2.真核生物中转录和翻译分开进行;
3.基因表达具有细胞特异性或组织特异性;
4.真核基因表达的调控在多个水平上进行:DNA水平的调控、转录水平调控、转录后水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控;
8、问答题 什么叫染色体步查?其用途如何?
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本题答案:染色体步查:采用一段分离自某一重组体一端的非重复DNA
本题解析:试题答案染色体步查:采用一段分离自某一重组体一端的非重复DNA片段作为探针以鉴定含有相邻序列的重组克隆。重复这一过程,直到得到整个目的基因区。用途:主要用于基因定位克隆,尤其是克隆与分析组成某一基因家族的真核DNA区段。
9、单项选择题 下列各组专业术语中,含义最为接近的是()
A、终止子与终止密码子
B、基因表达与基因转译
C、D、NA、退火与D、NA、复性
D、重组子与转化子
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本题答案:C
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10、问答题 说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。
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本题答案:限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则,即属名+种名+株
本题解析:试题答案限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则,即属名+种名+株名的各一个首字母,再加上序号.基本原则:3-4个字母组成,方式是:属名+种名+株名+序号;首字母:取属名的第一个字母,且斜体大写;第二字母:取种名的第一个字母,斜体小写;第三字母:
(1)取种名的第二个字母,斜体小写;
(2)若种名有词头,且已命名过限制酶,则取词头后的第一字母代替.第四字母:若有株名,株名则作为第四字母,是否大小写,根据原来的情况而定,但用正体.顺序号:若在同一菌株中分离了几种限制酶,则按先后顺序冠以I,Ⅱ,Ⅲ,…等,用正体.
11、单项选择题 识别10碱基序列的限制酶,大约每隔()进行一次切割。
A.4l0
B.104
C.2l0
D.102
E.24
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本题答案:A
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12、问答题 什么是原位菌落杂交(Colony Hybridization)?
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本题答案:将生长在或影印在微孔滤膜上的菌落(或噬菌斑)原位溶菌,
本题解析:试题答案将生长在或影印在微孔滤膜上的菌落(或噬菌斑)原位溶菌,原位进行DNA变性并原位固定在滤膜上,然后用放射性标记的探针同固定了的DNA进行杂交,经放射自显影后,确定哪一个菌落含有重组的DNA分子,再从参比平板上选取重组体。
13、问答题 小批量碱变性提取质粒DNA的原理与基本过程如何?
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本题答案:碱变性法是常用的质粒抽提方法,其原理是基于染色体DNA
本题解析:试题答案碱变性法是常用的质粒抽提方法,其原理是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
小批量碱变性提取质粒DNA的基本过程为——
(1)酶或机械法等方法破坏细胞,释放出胞内物质;
(2)加碱使DNA与蛋白质变性,加中和液复性。因为质粒DNA分子量小易复性,从而使得其与基因组DNA分离;
(3)在上清液中通过酚-氯仿抽提、去垢剂或酶使剩余蛋白质变性或水解,除去蛋白质;
(4)再加入醇溶液使质粒DNA变性沉淀而与其他水溶性物质分离;
(5)将沉淀溶解于有RNase的TE溶液中,温育降解RNA后电泳检测、-20℃保存。
14、问答题 在重组DNA操作中为了提高连接效率常常将非 互补的黏性末端修饰成平末端之后再进行连接。请问将黏性末端变为平端的方法有哪些?
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本题答案:(1)5’—突出黏性末端的补平
本题解析:试题答案(1)5’—突出黏性末端的补平,一般选用大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow大片段聚合酶进行填补;
(2)3’—突出黏性末端的切平,一般选用T4噬菌体DNA聚合酶或单链DNA的SI核酸切平。
15、名词解释 质粒不亲和性
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本题答案:在没有选择压力的情况下,两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中
本题解析:试题答案在没有选择压力的情况下,两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中稳定地共存的现象。
16、名词解释 S-D Sequence:S-D序列
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本题答案:在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上,含有一个转译起始
本题解析:试题答案在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上,含有一个转译起始密码子及同16S核糖体RNA3,末端碱基互补的序列,该序列最初由Shine、Dalgarno发现,故后来命名为Shine—Dalgarno序列,简称S-D序列。
17、单项选择题 限制酶的星号活性是指在非正常条件下,限制酶()
A.识别和切割序列发生变化。
B.切割活性大大提高。
C.识别和切割序列与原来完全不同。
D.可以任意切割DNA。
E.只能部分切割DNA。
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本题答案:A
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18、名词解释 southern杂交
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本题答案:DNA片段经电泳分离后,从凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜或
本题解析:试题答案DNA片段经电泳分离后,从凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上,然后与探针杂交。被检对象为DNA,探针为DNA或RNA。
19、单项选择题 限制性内切核酸酶的星活性是指()
A.在非常规条件下,识别和切割序列 也不发生变化的活性。
B.活性大大提高
C.切割速度大大加快
D.识别序列与原来的完全不同
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本题答案:D
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20、单项选择题 PCR反应产物的特异性取决于()
A.镁离子浓度
B.退火温度
C.引物碱基组成和长度
D.循环次数
E.A+B+C
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本题答案:E
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21、单项选择题 关于感受态细胞的下列说法不正确的是()
A.有人工感受态细胞和自然感受态细胞。
B.具有可诱导性。
C.有可转移性。
D.不同种细菌出现感受态的生理时期不同。
E.不同种细菌出现感受态的比例不同。
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本题答案:C
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22、问答题 什么是基因组文库(genomiclibrary)?构建基因组文库,涉及哪些基本过程?它同遗传学上的基因库有什么不同?
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本题答案:基因组文库是用基因工程的方法,人工构建的含有某一生物基
本题解析:试题答案基因组文库是用基因工程的方法,人工构建的含有某一生物基因组DNA的各种片段的克隆群。一般以改造的噬菌体DNA或黏粒作为载体,包括下列过程:
(1)高分子量染色体DNA的制备;
(2)体外重组连接;
(3)包装蛋白的制备;
(4)重组体的体外包装;
(5)将重组DNA导人寄主细胞;
(6)筛选。基因组文库同遗传学上所讲的基因库是完全不同的概念。基因库(genepool)是指在进行有性生殖的某一群体中,能进行生殖的个体所含总的遗传信息。在基因组文库的构建中,由于使用的载体不同,分为噬菌体载体和黏粒载体构建的基因组文库、YAC文库、BAC文库等。
23、单项选择题 构建基因文库一般使用的载体是() I质粒;IIλ-DNA;IIICosmid
A、I
B、II
C、III
D、II+III
E、I+II+III
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本题答案:E
本题解析:暂无解析
24、填空题 限制与修饰是宿主的一种保护体系,它是通过对外源()的限制和对自身DNA的修饰来实现的。
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本题答案:DNA
本题解析:试题答案DNA
25、多项选择题 下列关于限制酶的叙述正确的是()
A.在限制与修饰系统中,修饰主要是甲基化作用,一旦位点被甲基化了,其他限制酶就不能切割了。
B.限制酶在DNA中的识别/切割位点的二、三级结构影响酶切效率。
C.如果限制酶的识别位点位于DNA分子末端,那么接近末端的程度也影响切割。
D.已知某限制酶在一环状DNA上有3个切点,因此该酶切割这一环状DNA,可得到3个片段。
E.能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌,其自身的基因组中没有该酶识别的序列。
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本题答案:B, C, D
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26、填空题 甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一,在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在()以下。
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本题答案:5%
本题解析:试题答案5%
27、问答题 基因工程操作的基本步骤是什么?
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本题答案:①施工材料的准备,即目的基因、载体、工具酶和受体细胞(
本题解析:试题答案①施工材料的准备,即目的基因、载体、工具酶和受体细胞(宿主)的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA和载体分子切开。(切)
②目的基因与载体DNA的体外重组,形成重组DNA分子。(接)
③把重组的DNA分子引入受体细胞,并建立起无性繁殖系。(转和扩)
④筛选出所需要的无性繁殖系,并保证外源基因在受体细胞中稳定遗传、正确表达。(检)
28、单项选择题 用SDS-酚来抽提DNA时,SDS的浓度是十分重要的,当SDS的浓度为0.1%时()
A.只能将DNA抽提到水相
B.只能将RNA抽提到水相
C.可将DNA、RNA一起抽提到水相
D.DNA 和RNA都不能进入水相
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本题答案:B
本题解析:暂无解析
29、单项选择题 关于PCR扩增停滞的原因有很多种,但下列各项中,()项不是主要原因。
A.底物(模板)过剩
B.dNTP的大量消耗
C.产物的聚集
D.非特异性产物的竞争性抑制
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本题答案:B
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30、问答题 电泳的指示剂和染色剂有何区别,各自的作用是什么?
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本题答案:指示剂一定要在电泳前加入,指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗
本题解析:试题答案指示剂一定要在电泳前加入,指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液;(一般为:溴酚兰,二甲苯青)
作用:
①预知电泳的速率及方向;
②使样品呈现颜色,便于加样;
③一些高浓度蔗糖或其它物质增加DNA的密度,可以防止DNA的扩散
染色剂即可以在电泳前加入样液,又可以电泳后再对凝胶染色;(溴化已锭[EB]、硝酸银、Goldview染料)
作用:呈现出核酸电泳后的带型。
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