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1、问答题  什么是星活性，产生星活性的因素可能有哪些？

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本题答案：在非最适合的条件下酶的识别特异性降低，产生非特异性带，
本题解析：试题答案在非最适合的条件下酶的识别特异性降低，产生非特异性带，这种活性称星活性。产生Star活性的因素高浓度甘油，碱性pH，存在Mn2+，低离子强度，低盐浓度，低pH

2、单项选择题  大肠杆菌出现感受态的生理期是（）

A.潜伏期
B.对数期
C.对数后期
D.平衡期
E.衰亡期

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

3、单项选择题  在翻译过程中．mRNA必需首先与核糖体相结合才能进行蛋白质合成。在原核生物中，mRNA分子上有两个核糖体结合位点，一个是起始密码AUG，另一个是（）

A、启动子
B、调节基因
C、SD序列
D、终止子

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

4、单项选择题  Clark作了一个有趣的实验，发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在双链DNA的末端加一个碱基，主要是加（）

A.dGTP
B.dATP
C.dCTP
D.dTTP

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

5、问答题  杂交液的成分是什么？

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本题答案：反应液中每增加1%的甲酰胺浓度，tm值可降低0.72℃
本题解析：试题答案反应液中每增加1%的甲酰胺浓度，tm值可降低0.72℃。6M尿素，降低Tm约30℃惰性多聚体可用来促进250个碱基以上的探针的杂交率。对单链探针可增加3倍，而对双链探针、随机剪切或随机引物标记的探针可增加高达100倍。

6、名词解释  RT-PCR：逆转录PCR

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本题答案：先用逆转录酶作用于mRNA，以寡聚dT为引物合成cDN
本题解析：试题答案先用逆转录酶作用于mRNA，以寡聚dT为引物合成cDNA第一链，然后用已知一对引物，扩增嵌合分子，这种方法称为逆转录PCR。

7、单项选择题  基因工程的单元操作顺序是（）

A、增，转，检，切，接
B、切，接，转，增，检
C、接，转，增，检，切
D、检，切，接，增，转
E、切，接，增，转，检

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

8、填空题  为提高重组转化效果，对同一种酶切后载体进行（）处理。

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本题答案：脱磷
本题解析：试题答案脱磷

9、单项选择题  T4-D、NA、连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段D、NA、片段连接在一起，其底物的关键基团是（）

A、2’-OH和5’–P
B、2’-OH和3’-P
C、3’-OH和2’–P
D、5’-OH和3’-P

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

10、问答题  可采用哪些方法进行目的片段与载体的连接？

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本题答案：（1）目的片段与载体经相同的限制性内切酶或同尾酶切割，
本题解析：试题答案（1）目的片段与载体经相同的限制性内切酶或同尾酶切割，产生匹配的粘性末端，可直接进行连接。
（2）目的片段与载体经限制性内切酶切割后，产生平末端，也可直接进行连接。但是由于平末端连接效率较低，可采用下面的方法进行连接。
（3）同聚物加尾法：利用末端转移酶在载体及外源双链DNA的3& 91Exam.orgrsquo;端各加上一段寡聚核苷酸，制成人工黏性末端，外源DNA和载体DNA分子要分别加上不同的寡聚核苷酸，如dA（dG）和dT（dC.，然后在DNA连接酶的作用下涟接成为重组的DNA。这种方法的核心是利用末端转移酶的功能，将核苷酸转移到双链DNA分子的突出或隐蔽的3’-OH上。以Mg2+作为辅助因子，该酶可以在突出的3’-OH端逐个添加单核苷酸，如果用Co2+作辅助因子则可在隐蔽的或平末端的3’-OH端逐个添加单个核苷酸。
（4）接头连接法：将人工合成的或来源于现有质粒的一小段DNA分子加到载体或外源DNA的分子上，在这一小段DNA分子上有某种限制性内切核酸酶的识别序列，这样便在载体DNA和外源DNA上制造出新的酶切点，产生匹配的黏末端以便于连接。这一小段含有酶切点的DNA分子称为连接器分子。
（5）PCR接头法：设计含有限制酶切位点的引物，在PCR过程中在目的片段直接加上接头

11、多项选择题  下列哪些补体调节因子具有使机体正常组织细胞免受补体介导的损伤作用的功能()

A．B因子
B．MCP
C．CR1
D．C8bp
E．CD59

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本题答案：B, C, D, E
本题解析：暂无解析

12、单项选择题  分子克隆中用T载体主要是与下列哪种产物连接（）

A.单酶切产物
B.双酶切产物
C.同裂酶产物
D.PCR产物
E.酶切后形成的平末端产物

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本题答案：D
本题解析 ：暂无解析

13、问答题 &nbs p;用酚抽提蛋白质时，离心后，为什么蛋白质总是会停留在水相和酚相之间？

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本题答案：酚使蛋白分子间脱水而变性，变性蛋白的密度比水大，但比酚
本题解析：试题答案酚使蛋白分子间脱水而变性，变性蛋白的密度比水大，但比酚小，因此停在中间。

14、填空题  质粒有（）和松弛型两种类型，在克隆基因中常用的是松弛型，在表达研究中常用的是严紧型。

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本题答案：严紧型
本题解析：试题答案严紧型

15、问答题  质粒的不相容性及其分子机理。

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本题答案：定义：任何两种含有相似复制子结构的不同质粒，不能同时存
本题解析：试题答案定义：任何两种含有相似复制子结构的不同质粒，不能同时存在于一个细胞中，这种现象称为质粒的不相容性。
分子机理：两种含有相似复制子结构的不同质粒，在复制同时受到同一种拷贝数控制系统的干扰，致使两种质粒的最终拷贝数不同，其中拷贝数多的质粒在以后的细胞分裂周期中更具优势。

16、问答题  试分析提高平端DNA连接效率的可能方法。

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本题答案：1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。本题解析：试题答案1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。
2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。
3、足够多的载体和插入片段是最重要的。
4、平端的连接对于离子浓度很敏感
5、尽可能缩小连接反应的体积
6、建议放在四度冰箱连接两天效率更高比14度好

17、名词解释  同裂酶（同切点酶）

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本题答案：有一些来源不同的限制酶识别的是同样的核苷酸靶序列，这类酶称为
本题解析：试题答案有一些来源不同的限制酶识别的是同样的核苷酸靶序列，这类酶称为同裂酶。

18、问答题  什么是蓝白斑筛选？其原理是什么？

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本题答案： 91exam.org概念：根据β-半乳糖苷酶显色反应筛选含有外源DNA插入序列的
本题解析：试题答案概念：根据β-半乳糖苷酶显色反应筛选含有外源DNA插入序列的重组体克隆。原理：当外源DNA插入到载体lacZ标记基因上，导致β-半乳糖苷酶基因失活，因此通过大肠杆菌转化子菌落在添加有X-gal-IPTG培养基中的颜色由蓝色变成白色菌落这一颜色变化直接观察出来。

19、单项选择题  基因工程操作常用的酶是：（I内切酶II连接酶III末端转移酶IV聚合酶）（）

A.I+II
B.I+III+IV
C.II+III+IV
D.I+II+IV+III

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

20、问答题  怎样将一个平末端DNA片段插入到Eco RI限制位点中去？

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本题答案：化学合成一些长为10bp含有Eco RI识别位点的短的
本题解析：试题答案化学合成一些长为10bp含有Eco RI识别位点的短的DNA片段，然后与待克隆片段两端连接起来，如果用EcoRI切割这种连接片段，就会产生Eco RI的单链末端。这种片段就可以插入到任何Eco RI的限制性内切酶位点中。

21、单项选择题  限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶（）

A.识别和切割序列发生变化。
B.切割活性大大提高。
C.识别和切割序列与原来完全不同。
D.可以任意切割DNA。
E.只能部分切割DNA。

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本题答案：A
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22、问答题  小批量碱变性提取质粒DNA的原理与基本过程如何？

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本题答案：碱变性法是常用的质粒抽提方法，其原理是基于染色体DNA
本题解析：试题答案碱变性法是常用的质粒抽提方法，其原理是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质－SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
小批量碱变性提取质粒DNA的基本过程为——
（1）酶或机械法等方法破坏细胞，释放出胞内物质；
（2）加碱使DNA与蛋白质变性，加中和液复性。因为质粒DNA分子量小易复性，从而使得其与基因组DNA分离；
（3）在上清液中通过酚－氯仿抽提、去垢剂或酶使剩余蛋白质变性或水解，除去蛋白质；
（4）再加入醇溶液使质粒DNA变性沉淀而与其他水溶性物质分离；
（5）将沉淀溶解于有RNase的TE溶液中，温育降解RNA后电泳检测、-20℃保存。

23、名词解释  质粒不亲和性

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本题答案：在没有选择压力的情况下，两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中
本题解析：试题答案在没有选择压力的情况下，两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中稳定地共存的现象。

24、填空题  甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一，在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在（）以下。

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本题答案：5%
本题解析：试题答案5%

25、单项选择题  下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是（）

A、质粒是共价环状的双链DNA分子
B、天然质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列
C、质粒在宿主细胞内能独立于染色体DNA自主复制
D、松弛复制型的质粒可用氯霉素扩增
E、质粒并非其宿主细胞生长所必需

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

26 、名词解释  Cosmid vector:黏粒载体

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本题答案：含有cos位点的质粒载体。
本题解析：试题答案含有cos位点的质粒载体。

27、单项选择题  用DEAE膜片法回收电泳分离的DNA片段时，在紧靠目的DNA片段前方的凝胶切一裂缝，以插入DEAE纤维素膜，该裂缝长度与DNA条带相比应（）

A.略短
B.等长
C.略长
D.A或B都可
E.A、B、C都可

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

28、填空题  限制性内切酶通常保存在（）浓度的甘油溶液中。

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本题答案：50%
本题解析：试题答案50%

29、单项选择题  目前在高等动物基因工程中广泛使用的载体是（）

A、质粒DNA
B、噬菌体DNA
C、病毒DNA
D、线粒体DNA
E、叶绿体DNA

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本题答案：C
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30、单项选择题  珠江三角洲发展外向型经济最主要的合作伙伴是（）

A.港澳地区
B.台湾地区
C.东南亚地区
D.美国

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本题答案：A
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