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1、名词解释  Post-source decay(源后衰变)

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本题答案：发生在离子源后的第一个无场区域，时间跨度为微秒；由于发
本题解析：试题答案发生在离子源后的第一个无场区域，时间跨度为微秒；由于发生在无场区域，所以产生的不同片段离子和母离子保持同样速度，用离子镜反射，将片段离子和母离子分离，按质量大小排列可形成离子谱，称为PSD谱

2、问答题  论述蛋白质组学与基因组学的区别和联系。

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本题答案：试题答案

3、名词解释  Tandem mass spectrometry(串联质谱)

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本题答案：串联质谱法是指用质谱作质量分离的质谱方法。它还有几种名
本题解析：试题答案串联质谱法是指用质谱作质量分离的质谱方法。它还有几种名称，如质谱-质谱法、多级质谱法、二维质谱法和序贯质谱法。
作用：
1、诱导第一级质谱产生的分子离子裂解，有利于研究子离子和母离子的关系，进而给出该分子离子的结构信息。
2、从干扰严重的质谱中抽取有用数据，大大提高质谱检测的选择性，从而能够测定混合物中的痕量物质。

4、名词解释  Proteomics（蛋白质组学）

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本题答案：指应用各种技术手段来研究蛋白质组的一门新兴学科，即研究
本题解析：试题答案指应用各种技术手段来研究蛋白质组的一门新兴学科，即研究细胞在不同生理或病理条件下蛋白质表达的异同，对相关蛋白质进行分类和鉴定。更重要的是蛋白质组学的研究要分析蛋白质间相互作用和蛋白质的功能.

5、名词解释  Post translational modification(蛋白质翻译后修饰)

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本题答案：肽链合成的结束，并不一定意味着具有正常生理功能的蛋白质
本题解析：试题答案肽链合成的结束，并不一定意味着具有正常生理功能的蛋白质分子已经生成。已知很多蛋白质在肽链合成后还需经过一定的加工（processing）或修饰，由几条肽链构成的蛋白质和带有辅基的蛋白质，其各个亚单位必须互相聚合才能成为完整的蛋白质分子。

6、名词解释  Matrix-assisted laser desorption/ionization基质辅助激光解吸电离技术 (MALDI)

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本题答案：是以激光脉冲照射在固定于平面电极上的蛋白质分子，经平行
本题解析：试题答案是以激光脉冲照射在固定于平面电极上的蛋白质分子，经平行电场加速，再由质谱仪进行分析。以波长337nm的氮气激光脉冲击打固定于基质上的蛋白质分子，使得蛋白质从基质上游离并带上微弱的正电荷。此时再经由高能平行电场加速提高核质比，进入质谱仪进行分析，此方式能 分析带电量低的分子，以及含有许多不同种类分子的混合物

7来源:91考试网 www.91exAm.org、问答题  简述与传统的分离技术相比较，PF-2D的优点。

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本题答案：试题答案

8、名词解释  Neutral loss scan 中性丢失扫描

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本题答案：中性丢失扫描是三重四极杆串联质谱仪所独有的数据采集方式
本题解析：试题答案中性丢失扫描是三重四极杆串联质谱仪所独有的数据采集方式之一，它的主要工作原理是一级质谱（MS1）和二级质谱（MS2）同时扫描，而MS2与MS1始终保持质量差Δm，最终的图谱将显示那些来自一级谱图中通过裂解丢失中性碎片（Δm）的离子。

9、名词解释  De novo sequencing(从头测序)

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本题答案：unknow peptide从头测序为蛋白质组研究提供
本题解析：试题答案unknow peptide从头测序为蛋白质组研究提供了一种不用借助于任何蛋白质序列数据库信息，直接解读串联质谱数据的方法。其基本算法主要由4个部分组成：质谱图的构建、离子类型的确定、测序算法以及打分算法。

10、问答题  请列举预测蛋白质相互作用的方法。

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本题答案：1、酵母双杂交法：主要原理是将可能存在相互作用的蛋白之
本题解析：试题答案1、酵母双杂交法：主要原理是将可能存在相互作用的蛋白之一与Gal4的DB结构域融合。另外一个与Gal4的AD结构域的酸性区域融合。如果在两个待测蛋白之间存在相互作用，那么分别位于这两个融合蛋白上的DB和AD就能重新形成有活性的转录激活因子，从而激活相应基因的转录与表达。通过对报道基因表达产物的检测，反过来可判别作为“诱饵”和“猎物”的两个蛋白质之间是否存在相互作用。
2、免疫共沉淀法：免疫共沉淀是一种比较经典的蛋白质相互作用方法，其实验比较简单。裂解细胞后，加入抗体，抗原被沉淀下来后洗涤，去除非特异性亲和再分析结合复合体。目前常使用Pull－down实验结合免疫共沉淀可以对可能的蛋白质相互作用进行验证。
3、高通量质谱蛋白质鉴定：使用一分子标签如FLAG标记把蛋白，使融合蛋白在细胞内过表达。通过免疫亲和（FLAG抗体）捕获到抽提物中把蛋白形成的蛋白质复合物。SDS-PAGE分离复合体各组分，胰酶酶切后，进行质谱分析。此法适合于分析天然状态下细胞内浓度较低的蛋白质，但是如果蛋白质浓度过高则背景较强，产生假阳性。
4、串联亲和纯化（tandem affinity purification，TAP）：该技术核心是设计一个双重分子标签，包括A蛋白（IgGbindingprotein）、TEV蛋白酶切位点、钙调素结合蛋白。将TAP标签构建到靶蛋白上，然后在宿主细胞内表达融合蛋白，表达水平接近把蛋白的天然状态。可以与把蛋白相互作用的其他蛋白质结合到融合蛋白上，形成复合体。细胞裂解物和IgG基质温浴在一起，通过A蛋白复合物结合在IgG上。冲洗后，加入TEV蛋白酶，洗脱复合物。在Ca2+存在的情况下，洗脱液与包被钙调素的温育在一起，复合物就结合在珠子上。进一步洗去杂质后，加入EGTA鳌合，复合物脱落。SDS-PAGE分离复合体各组分，胰酶切割后进行质谱分析。该方法检测到的蛋白质相互作用更加接近自然条件下蛋白质的性质，包括浓度，定位和翻译后修饰。适合于
检测大量蛋白质之间的相互作用而形成的复合物，而不局限在两个蛋白质之间相互作用。但是不能检测蛋白质复合物形成的顺序。需要与酵母双杂交等方法互补。

11、问答题  蛋白质组学定量分析方法的主要原理。

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本题答案：蛋白质组学定量分析主要包括两种方法：
1、建
本题解析：试题答案蛋白质组学定量分析主要包括两种方法：
1、建立在2－DE基础上的电泳方法：其原理是通过比较通过比较蛋白质在不同胶上的染色强度来进行相对定量。提供蛋白质表达水平的信息。
2、利用质谱检测技术：对来自不同样品的肽段标上一个内部标准，使得可以识别不同样品来源的肽段，以质谱峰的信号强度就可以作为定量的依据。

12、问答题  自由流电泳分离蛋白质的机理及其优缺点。

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本题答案：自由流电泳（CFFE）是在无固相支持介质的薄的矩形分离
本题解析：试题答案自由流电泳（CFFE）是在无固相支持介质的薄的矩形分离中，以缓冲液为分离介质进行生物大分子或不溶性颗粒及细胞等物质的分离纯化技术。在CFFE中，分离介质在两块平行的矩形板组成的分离腔 内形成层流（两板之间的距离通常介于0.5-3.0mm）分离腔的两侧为正负电极室。被分离物质由一口径很小的输入口进入分离介质中，形成一细带，在垂直于液流的方向上加上均匀的电场后，样品中各种组分由于各自电泳迁移率的差异而各自向与所带电荷符号相反的电极以不同的速度迁移，相同电泳迁移率的物质则迁移为一窄带，在到达分离腔出口处由分级手机器收集。
优点：CFFE是一个连续的而不是分批进行的分离过程。同时由于它不使用有机溶剂、高盐溶液，及硅胶或凝胶等支持介质，分离调节相当温和，对有活性的生物材料的分离纯化提供了十分合适的分离环境。缺点：因自由流电泳是完全无载体的液相电泳，因此除了电泳本身所固有的影响因素外（如：焦耳热，电动力学变形），还有层流（流体力学变形）以及一些综合因素的影响（电流体力学变形等），且这些过程常常互相关联，使整个过程变得极其复杂。重力对自由流电泳会产生影响。颗粒沉降、小滴沉降和热对流是影响自由流电泳的三种重力现象，在微重力条件下这些现象几乎消失，这使CFFE的放大在空间有可能得到实现。

13、名词解释  Proteome（蛋白质组）

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本题答案：由一个细胞或者组织的基因组所表达的全部相应的蛋白质，称
本题解析：试题答案由一个细胞或者组织的基因组所表达的全部相应的蛋白质，称为蛋白质组。

14、问答题  质谱仪的组成及其主要技术指标。

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本题答案：质谱仪一般由进样装置、离子化原、质量分析器、离子检测器
本题解析：试题答案质谱仪一般由进样装置、离子化原、质量分析器、离子检测器、数据分析系统组成。其中，离子化原用来待分析的分子转化成气态离子。在质量分析器中，不同荷质比m/z离子在一个随时间变化的电场作用下分离。离子检测器用来接受在质量分析器中分离的带有不同荷质比的离子检测m/z值以及不同m/z的离子密度。主要技术指标包括：灵敏度，分辨率，准确度，稳定性，质量范围，动态范围

15、名词解释  Mass Spectrometer（质谱仪）

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本题答案：质谱仪是一个用来测量单个分子质量的仪器，但实际上质谱仪
本题解析：试题答案质谱仪是一个用来测量单个分子质量的仪器，但实际上质谱仪提供的是分子的质量与电荷比（m/zorm/e）。分离和检测不同同位素的仪器。即根据带电粒子在电磁场中能够偏转的原理，按物质原子、分子或分子碎片的质量差异进行分离和检测物质组成的一类仪器。质谱仪最重要的应用是分离同位素并测定它们的原子质量及相对丰度。

16、问答题  试述如何应用2D-PAGE进行差异蛋白质组学的研究，并分析其优缺点。

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本题答案：2D-PAGE原理是根据蛋白质的等电点和分子量的差异而
本题解析：试题答案2D-PAGE原理是根据蛋白质的等电点和分子量的差异而使之分别在等电聚焦（isoelectric focusing，IEF）和聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）中分离出来。
应用2D-PAGE 91ExaM.org进行差异蛋白质组学研究主要步骤有：
1、在应用2D-PAGE研究差异蛋白质组学问题时首先要获得要进行差异比较的组织，如肿瘤组织与癌旁正常组织，然后裂解组织和细胞，抑制蛋白酶活性，出去非蛋白质的DNA，RNA，脂类等物质，溶解蛋白质，溶解并抽提总蛋白质。
2、将准备好的蛋白质进行2D-PAGE实验，先选择合适的PH范围进行等电聚焦，平衡胶条，再进行第二维的聚丙烯酰胺凝胶电泳。
3、对2D凝胶进行染色处理（可选择各种染色方法），利用软件分析比较成对组织的2D结果，找到上调或下调的蛋白质点。
4、将有差异的蛋白质点切割下来进行质谱分析，质谱谱图通过查询数据库找得蛋白质点对应的蛋白质。5、对于得到的有差异的蛋白质要进一步进行验证，常用的手段包括：WesternBlot，RT-PCR，免疫组织化学等。
利用2D－PAGE进行差异蛋白质组学分析的优点主要在于：
1、效率高：目前，一块胶板（16cm×20cm）可检测到3000～4000个甚至10000个蛋白斑点。
2、可重复性好：80年代开始采用固定化pH梯度胶的IEF，克服了载体两性电解质阴极漂移等许多缺点而得以建立非常稳定的可以随意精确设定的pH梯度，可建立很窄的pH范围（0.05U/cm），对特别感兴趣的区域做第二轮分析，大大提高了分辨率。固定化pH梯度胶已有商品生产，基本解决了重复性的问题；
3、灵敏度高：SDS-PAGE有垂直板和水平超薄胶电泳两种方法，可分离10～100kD分子量的蛋白质；银染色法可检测到4ng蛋白，同位素标记法最灵敏，可测定20ppm的标记蛋白。
利用2D－PAGE进行差异蛋白质组学分析的缺点主要在于：
1、对盐，DNA等杂质高度敏感。
2、对于溶解度低的输水性蛋白质，酸性，碱性蛋白质效果不好。
3、对PH和MW的范围有所限制。
4、耗时，无法自动化。

17、名词解释  Peptide sequence tag 肽序列标签

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本题答案：将蛋白质进行酶切降解做电喷雾质谱产生包括多电荷峰在内的
本题解析：试题答案将蛋白质进行酶切降解做电喷雾质谱产生包括多电荷峰在内的肽质量指纹谱，选择有一定丰度的双电荷峰经气体碰撞活化池碰撞后产生碎片，其中包含着结构信息，由这些信息可以推出蛋白质的某一肽段的部分氨基酸序列测定出的部分氨基酸序列和其序列两段的质量称为肽序列标签。

18、名词解释  Peptide mass fingerprint(肽指纹谱)

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本题答案：peptide molecular weight肽指纹
本题解析：试题答案peptide molecular weight肽指纹图谱，PMF，peptide mapping fingerprint，蛋白酶解后产生多个肽片断，然后利用质谱（通常用MALDI－TOF）测量这些肽段的分子量，然后上网进行蛋白谱库搜索，以确认此蛋白是何种蛋白，此为PMF。这些肽段就像蛋白的指纹一样，有了这些肽段，就可以确认蛋白了。

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